La preparació de l’àcid acètic glacial es pot fer mitjançant dos mètodes: síntesi artificial i fermentació bacteriana. El mètode de biosíntesi, que utilitza la fermentació bacteriana, només representa el 10% de la producció mundial, però no deixa de ser el mètode més important per a la producció d’àcid acètic, especialment el vinagre, perquè les regulacions de seguretat alimentària de molts països requereixen que el vinagre en els aliments sigui obligatori. passar el mètode biològic. La preparació i el mètode de fermentació es divideixen en mètode de fermentació aeròbica i mètode de fermentació anaeròbica.
Amb suficient oxigen, els bacteris Acetobacter poden produir àcid acètic a partir d'aliments que contenen alcohol. S'utilitza habitualment sidra o vi barrejat amb cereals, malt, arròs o patates i puré i fermentat. L’equació química per a la reacció de fermentació d’aquests bacteris és:
C₂H5OH + O₂ → CH₃COOH + H₂O